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淋球菌的基因探针诊断?

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淋球菌的基因探针诊断   
淋球菌的基因探针诊断所用的探针有:质粒DNA探针染色体基因探针和rRNA基因探针。 

(1)质粒DNA探针   
①隐蔽质粒DNA探针淋球菌质粒分为三种:接合性质粒分子大为36kbDNA;耐药性质粒包括两个质粒DNA长分别为5.6kb和7.1kb;隐蔽质粒4.2kb其中隐蔽质粒存在于96%的临床淋球菌分离株中其它奈瑟菌不含有此质粒故可用它的序列作为特异DNA探针检测淋球菌Torres采用核酸杂交技术检测淋球菌所用探针为隐蔽质粒用该探针对株淋球菌和株相关菌株的检测有株淋球菌杂交反应阳性占93%还可与个别其它的奈瑟菌出现交叉反应对测定探针的敏感性实验表明可检出CFU淋球菌研究证明隐蔽质粒中CPPB基因序列在所有的淋球菌染色体中(包括不含该质粒的菌株)因此CPPB基因探针具有良好的特异性和敏感性Torres等用CPPB基因探针检测了份临床标本采用非放射性地高辛标记系统其敏感性和特异性分别为95%和98%   

②耐药性质粒DNA探针   


淋球菌的抗药质粒可分为:
①产青毒素酶淋球菌(PPNG)其β-内酰胺酶阳性;
②具有高水平的质粒介导的耐四环素淋球菌(TRNG)。   

PPNG菌株是年首次在实验室分离得到的该菌中含有编码产青毒酶的基因该基因既可整合于染色体上也可出现在质粒DNA中而后者居多称之为产青毒素酶质粒质粒有二种大小分别为7.4kb5.3kbPescador年设计一特异的检测淋球菌编码β-内酰胺酶基因的探针采用酶化学发光法标记液相杂交用测光计测是特异杂交体的光量在4h内可检测-CFU的PPNG菌株TRNG菌株虽对四环素耐药但通常对β-内酰胺酶类及喹诺酮类抗菌素敏感因此在实验室药敏检测中可归为敏感细菌Pescador用抗四环素淋球菌(TRNG)tetm基因的寡核苷酸探针,该基因介导抗四环素,用酶化学发光标记,液相杂交,4h内可直接从临床标本中检出含有tetm基因的1.5×CFu的淋球菌。   

(2)染色体探针   
染色体探针包括已知功能的基因探针如菌毛DNA探针和paI基因探针这些基因在淋球菌感染人细胞的过程中起着重要作用;未知功能的基因探针这些探针序列与染色体的特定序列互补但目前还不知这些基因序列的功能以上两种染色体探针由于在淋球菌中互补序列的拷贝数较低检测灵敏度较低因此一般用的不多除非有特殊的研究目的。   

(3)rRNA基因探针   
rRNA基因探针是将与rRNA互补的DNA作为探针该探针的靶序列是rRNA序列rRNA的基因探针的特点是:
①可以增加探针检测的灵敏度rRNA基因探针可同时检测rRNA分子和DNA分子

②rRNA具有进化上的保守性;

③杂交方法简便快速;

④由于rRNA的含量较高标本不需增菌美国Gen-Probe公司生产的淋球菌检测探针PACEC是以rRNA及其基因为检测靶序列采用放射性标记在2h内可以完成检测Peter用这种探针检测个临床标本结果灵敏度和特异性分别为92.9%99.4%他认为PACEC系统筛查临床标本中淋球菌是一个可靠的方法该探针还可以检测无症状淋球菌感染者这是目前培养难于达到的。
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